В настоящее время более 4 миллионов детей рождены благодаря развитию такого направления в медицине как Вспомогательные Репродуктивные Технологии (ВРТ). В Украине эта цифра достигла 40000 детей. И с каждым годом растет с геометрической прогрессией. Этому способствует стремительное развитие научно-практических и социальных аспектов связанных с лечением бесплодия. Один из важнейших факторов улучшения эффективности попыток ЭКО является криоконсервация гамет и эмбрионов.
Сама идея сохранения и использования гамет возникла достаточно давно, о чем свидетельствуют первые данные, появившиеся еще в 18 веке в Италии. L. Spallanzani в 1776 г. Заметил что при использовании в качестве консерванта обычный снег, сперматозоиды сохраняли свою подвижность после оттаивания. В 1866 году J. Mantegazza предложил создать банк спермы, для солдат уходящих на войну. В 1938 году проф. F. Jahnel (Германия) предложил криоконсервировать мужские гаметы в жидком азоте при температуре -196°С, а так же в жидком гелии при температуре -299°С. Оказалось, что после размораживания сперматозоиды сохраняют жизнеспособность.
Одним из ключевых факторов успеха в криоконсервации биологического материала явилось открытие веществ обладающих протективными свойствами. Один из наиболее эффективных протекторов для замораживания спермы является глицерин. С этого момента началось широкое использование криоконсервантов (криопротекторов) для сохранения жизнеспособности клеток во многих отраслях медицины.
В 1953 году были сделаны первые удачные попытки рождения ребенка после применения криоконсервации спермы.
Чуть позже, в 1972 г., были предприняты успешные замораживания эмбрионов млекопитающих. D. Whittighem сообщил о рождении живого потомства у мышей после переноса криоконсервированных эмбрионов.
В 1983 г. была проведена удачная процедура ЭКО после криоконсервации и оттаивания эмбрионов человека, в Нидерландах родились монозиготные близнецы. После этого криоконсервация эмбрионов получила широкое применение во всем мире.
Существует два основных метода заморозки эмбрионов: медленная заморозка (эмбрионы погружаются в среду с криопротектором и в течении двух часов температура понижается до -198°С). Данный метод нашел свое применение и долгие годы давал сравнительно хорошие результаты. В то же время, с 1985 года начал развиваться второй метод заморозки – быстрая заморозка (витрификация). Данный метод подразумевает погружение эмбрионов с криопротектором в жидкий азот и скорость охлаждения достигает 2500°С/мин.
Только недавно витрификация сделала прорыв в отношении выживаемости и последующей имплантации эмбрионов. Успех обеспечен новыми протоколами витрификации Kitazato и Kuwayama. Процедура витрификации заключается в двух етапах: 1 преэквилибрация (погружение эмбрионов в среду с этиленгликолем или ДМСО) продолжительность процедуры до 15 минут для замещения внутрицитоплазмотической жидкости на криопротектор. Затем эмбрионы погружаются в непроникающие криопротекторы (сахароза).
Витрификация эмбрионов или медленная заморозка — что эффективнее
Процедура оттаивания выполняется в 3 этапа. Первый — помещение эмбрионов в раствор сахарозы. Второй этап — уменьшение концентрации сахарозы. Третий этап — отмывка в среде не содержащей протекторы и помещение в культуральную среду.
Данные, по поводу витрификации, говорят о ее надежности и дальнейшей перспективе улучшения результативности протоколов ЭКО.
Существует множество исследований где принимали участие достаточное колличество пациентов которые прошли процедуру переноса эмбрионов после витрификации, более 15 000 человек, при этом выживаемость эмбрионов составила более 92 %, а имплантация эмбрионов составляет более 53%.
В то же время, для сравнения приведу несколько исследований медленной заморозки и витрификации:
- B. Balaban и соав. опубликовал свои исследования где сравнивалось выживание эмбрионов
Витрификация Медленная заморозка
Колличество эмбрионов 234 232
Выжившие эмбрионы 222(94,8%) 206(88,7%)
100% выжившие бластомеры в эмбрионах 173(77,9%) 106(51,4%)
А так же исследование Gary D. Smith Ph.D. в котором были заморожены ооциты
Витрификация Медленная заморозка
Колличество ооцитов 349 238
Выжившие ооциты 281(81%) 159(67%)
Выживание ооцитов через 4 часа 260(75%) 155(65%)
Оплодотворение 200(77%) 104(67%)
Развитие эмбриона на вторые сутки 168(84%) 74(71%)
Биохимическая беременность 22/48(46%) 5/30(17%)
Клиническая беременность 18/48(38%) 4/30(13%)
Как мы можем видеть из данных исследований, витрификация статистически достоверно дает лучшие результаты по выживаемости и имплантации эмбрионов. Так же заморозка эмбрионов дает значительно лучший результат чем заморозка ооцитов. При этом, из последних данных можно с уверенностью сказать, что эффективность цикла повышается при витрификации бластоцист.
Выводы: Подводя итоги выше сказанного, репродуктология сравнительно молодая наука, но в данный момент является одной из самых востребованных и актуальных направлений в медицине. За последние 10 лет было проведено усовершенствование методик лечения пациентов, в эти новейшие методики входит замораживание, хранение и оттаивание как гамет, так и эмбрионов. По результатам беременностей и рождению здорового ребенка витирификация дает возможность проводить предимплантационный генетический скрининг, а так же подготовить эндометрий пациентки к наиболее высокому шансу имплантации, что увеличиват шансы на беременность и роды.
В каких случаях требуется витрификация эмбрионов?
1. Если в результате процедуры ИКСИ было получено больше эмбрионов, чем планируется перенести в естественном цикле.
2. В случае выбора криопротокола или сегментации цикла.
На какой срок может проводиться заморозка эмбрионов?
На любой срок. При хранении качество и жизнеспособность эмбрионов остается неизменной.
Какие недостатки имеет криохранение?
На сегодняшний день, криохранение является самым безопасным и надежным способом сохранения клеток и гамет.